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    激光共聚焦顯微鏡制備樣品時玻璃片如何處理

    發布時間:2022-07-21      點擊次數:192
      隨著檢測設備的提升、各種顯微技術的發展和標記手段的提高,如激光共聚焦顯微鏡在生物學研究中的廣泛應用,使得研究者能夠迅速、準確地觀察到蛋白質在細胞內的表達情況和定位。
      
      通過顯微鏡觀察熒光標記細胞內的蛋白質和分子,為生物學的研究提供了更直觀的觀測手段。因此免疫熒光樣品的制備也成為生物學研究中的基本技術方法。
      
      鑒于生物體內的復雜多樣性,制備免疫熒光樣品的方法也存在一些差異。本文主要介紹構建綠色熒光融合蛋白表達載體,并在培養細胞中表達綠色熒光融合蛋白及免疫熒光樣品的制備過程。
      
      將構建好的熒光表達載體進行大量擴增,并通過質粒抽提試劑盒大量純化,得到不含有內毒素的純化質粒。將表達載體導入到培養細胞中后,經過培養即可進行熒光蛋白的檢測。而將基因導入哺乳動物培養細胞的方法有很多種,生化轉染法是很常用的導入培養細胞方法。
      
      為了方便在激光共聚焦顯微鏡上觀察,免疫熒光樣品通常需要制備在載玻片上。培養的細胞需要在蓋玻片上貼壁生長。蓋玻片的厚度應小于0.17mm。購買到的蓋玻片需要用玻璃洗液浸泡處理一天以上,再用去離子水沖洗掉殘存的洗液。
      
      蓋玻片經過高溫滅菌處理后,放置在細胞培養皿中,用于培養細胞。對于貼壁不牢的細胞,或者與細胞外基質相關的研究,玻璃片需預先包被細胞外基質,如poly-L-Lysine,Fibronectin,Laminin等。
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